PCR實(shí)驗(yàn)室的污染類型有哪些？該怎樣預(yù)防呢？
發(fā)布時(shí)間：2021-08-10 16:43
PCR實(shí)驗(yàn)室可以通過DNA基因追蹤系統(tǒng)來掌握患者體內(nèi)的病毒含量，具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是容易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。那么PCR實(shí)驗(yàn)室的污染類型有哪些？該怎樣預(yù)防呢？
一、PCR實(shí)驗(yàn)室的污染類型
1、樣本間交叉污染
標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染，或標(biāo)本放置時(shí)，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染。標(biāo)本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染。有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散，導(dǎo)致彼此間的污染。
2、PCR試劑的污染
主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染
這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題，因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大(一般為1013拷貝/mL)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可造成假陽性。
4、實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對(duì)照的檢驗(yàn)室，這個(gè)問題也比較常見。因?yàn)榭寺≠|(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖的簡(jiǎn)便性及具有很強(qiáng)的生命力，其污染可能性也很大。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室的防污染方法
1、嚴(yán)格執(zhí)行各區(qū)功能劃分：
試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。
標(biāo)本制備區(qū)：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對(duì)于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。
擴(kuò)增區(qū)：cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測(cè)序等。
試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增區(qū)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)用品，包括移液器等器具應(yīng)專用，空氣、物品流向依次為：試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，不可逆行。
2、清潔的實(shí)驗(yàn)用品：
實(shí)驗(yàn)室自配試劑（去離子水、緩沖液等）和所有使用器具在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或紫外殺菌。槍尖、反應(yīng)管等實(shí)驗(yàn)耗材應(yīng)一次性使用。
3、正確的實(shí)驗(yàn)操作：
實(shí)驗(yàn)應(yīng)在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，工作臺(tái)內(nèi)應(yīng)放置PCR專用的微量離心機(jī)、各量程的移液器和其他必須物品。
實(shí)驗(yàn)的過程中選擇最合適尺寸的手套并能及時(shí)更換，在進(jìn)出不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域或進(jìn)行模板操作后都應(yīng)更換實(shí)驗(yàn)服、口罩、帽子及手套，以避免不同實(shí)驗(yàn)區(qū)交叉污染。
裝有PCR試劑的反應(yīng)管在打開之前應(yīng)先瞬時(shí)離心，將管壁及管蓋上的液體離至管底，降低污染手套或加樣器的風(fēng)險(xiǎn)；謹(jǐn)慎開啟反應(yīng)管，防止管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠導(dǎo)致污染。
吸加試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)范要求進(jìn)行，遵守“慢吸快打”原則，盡量一次性完成，忌多次抽吸，以避免氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。
PCR試劑建議小量分裝，以減少反復(fù)凍融、重復(fù)取樣次數(shù)；多樣本PCR反應(yīng)時(shí)，先配制反應(yīng)混合液分裝至反應(yīng)管中，最后加入樣本核酸，請(qǐng)勿同時(shí)開蓋，盡量保證單人單管，實(shí)現(xiàn)完全閉管操作。
實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)與樣品和PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同處。
PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)完成后及時(shí)將反應(yīng)管取出，用一次性手套將產(chǎn)物反應(yīng)管包裹丟棄，保證管蓋緊閉。
4、規(guī)范的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：
應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定，實(shí)驗(yàn)中設(shè)立陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照，全程質(zhì)控實(shí)驗(yàn)過程，驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性，并協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性。
以上就是PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來源及防污染措施。更多實(shí)驗(yàn)室相關(guān)產(chǎn)品信息，敬請(qǐng)關(guān)注河南中潤(rùn)實(shí)驗(yàn)工程公司官網(wǎng)，產(chǎn)品咨詢及實(shí)驗(yàn)室EPC設(shè)計(jì)建設(shè)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站客服。
